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3、 指示病毒选择
指示病毒可分为“相关”病毒(如人血液制品可能携带的人类病毒 HAV、HBV、HIV 和 B19 等)、特异“模型”病毒(如 CHO 表达系统的 MVM、x-MuLV 病毒,杆状病毒表达系统的 BV 病毒等)和非特异“模型”病毒(如 CHO 表达系统的 PRV 和 Reo3 病毒)三类,应优先选择与潜在污染病毒密切相关的病毒,如相关病毒不能获取或不适于体外培养,可采用特异“模型”病毒代替。
评价病毒清除的总能力时,应选择具有不同特性的非特异性模型病毒,包括 DNA/RNA、有/无包膜、颗粒大小、尤其对物理/化学处理明显耐受的病毒等指示病毒需有足够高的滴度,同时所选指示病毒不能对操作人员和环境造成生物危害。
验证平台拥有丰富的病毒毒种毒株,且背景清楚,纯度高,滴度可达 8~9Log10/ml。表 1 列出了 CHO 表达制品工艺验证最常用四种指示病毒:
表 1 病毒清除工艺验证中常用指示病毒性质
病毒名称 |
病毒特性 |
检测方法 |
病毒滴度 Log10/ml |
Reo3(呼肠孤病毒) |
双链 RNA 病毒,无包膜,抗性中50-70nm |
TCID50 Q-PCR |
8-9 |
MVM(鼠细小病毒 ) |
单链 DNA 病毒无包膜,抗性极高
18-26nm
|
TCID50 Q-PCR |
8.5-9.5 |
PRV(伪狂病毒) | 双链 DNA 病毒有包膜,抗性中120-200nm |
TCID50 Q-PCR |
8-9 |
MuLv (鼠白血病病毒) |
单链 RNA 病毒有包膜,抗性低 80-120nm |
TCID50 Q-PCR |
7.5-8.5 |
BV (杆状病毒) |
双链 DNA病毒有包膜 45×275nm |
TCID50 |
8-9 |
POL-1 (人脊髓灰质炎I型病毒) |
单链 RNA 病毒无包膜,抗性中 25-30nm |
TCID50 |
8-9 |
VSV (水疱性口炎病毒) |
单链 RNA 病毒有包膜,抗性低 70×150nm |
TCID50 Q-PCR |
8-9 |
PPV (猪细小病毒) |
单链 DNA 病毒无包膜,抗性高 18-24nm |
TCID50 Q-PCR |
7.5-8.5 |
HAdV-5
(人腺病毒5型) |
双链 DNA 病毒无包膜,抗性低
70-90nm |
TCID50 |
8.5-9.5 |
BPIV-3 (牛副流感病毒3型) |
单链 RNA 病毒有包膜,抗性低 150-200nm |
TCID50 |
8-9 |